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更新時間：2018-05-22 
瀏覽次數：16688JC-1法檢測線粒體膜電位，以及檢測線粒體膜電位的操作步驟！
線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1 法)(Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1)是一種以 JC-1 為熒光探針，快速靈敏地檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位變化的試劑盒，可以用于早期的細胞凋亡檢測，CCCP 作為誘導線粒體膜電位下降的陽性對照。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于研究診斷或其他用途。
產品組成：
編號 | 50T | 100T | Storage |
名稱 | |||
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試劑(A): JC-1 Stain(200×) | 3×100μl | 5×100μl | -20℃ 避光 |
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試劑(B): JC-1 Buffer(5×) | 40ml | 80ml | 4℃ |
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試劑(C): CCCP(10mM) | 10μl | 20μl | -20℃ |
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試劑(D): ddH2O | 45ml | 90ml | RT |
使用說明書 |
| 1 份 |
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操作步驟(僅供參考)：
1、配制 JC-1 染色工作液：
取適量 JC-1 Stain (200×)，按照每 50μl JC-1 Stain (200×)加入 8ml ddH2O 的比例稀釋 JC-1，劇烈 Vortex 充分溶解并混勻 JC-1 Stain。然后再加入 2ml JC-1 Buffer(5×)，
混勻后即為 JC-1 染色工作液。6 孔板每孔所需 JC-1 染色工作液的量為 1ml，其它培養器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每 0.5～1.0×106 細胞需 0.5ml JC-1 染色工作液。
2、設置陽性對照：
推薦 CCCP(10mM)按照 1:1000 的比例加入到細胞培養液中，稀釋至 10μM，處理細胞20min。隨后按照下述方法裝載 JC-1，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞，通常 10μM CCCP 處理 20min 后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經 JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料確定。
3、對于懸浮細胞：
3～4min，沉淀細胞，棄上清。
JC-1法檢測線粒體膜電位，以及檢測線粒體膜電位的操作步驟！
4、對于貼壁細胞：
注意：對于貼壁細胞，如果希望采用熒光分光光度計或流式細胞儀檢測，應先收集細胞，重懸后參考懸浮細胞的檢測方法。
5、對于純化的線粒體：
中的波長設置進行熒光檢測。 d. 用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察：方法同下面的步驟 6。
6、熒光觀測和結果分析：
檢測 JC-1 單體時可以把激發光設置為 490nm，發射光設置為 530nm；檢測 JC-1 聚合物時，可以把激發光設置為 525nm，發射光設置為 590nm。注意：此處測定熒光時不必把激發光和發射光設置在zui大激發波長和zui大發射波長。如使用熒光顯微鏡觀察，檢測 JC-1 單體時可以參考觀察其它綠色熒光時的設置，如觀察 GFP 或 FITC 時的設置；檢測 JC-1 聚合物時可以參考觀察其它紅色熒光，如碘化丙啶或 Cy3 時的設置。出現綠色熒光說明線粒體膜電位下降，并且該細胞很可能處于細胞凋亡早期。出現紅色熒光說明線粒體膜電位比較正常，細胞的狀態也比較正常。
注意事項：
1、 JC-1 Stain(200×)應*溶解混勻后使用，但應避免反復凍融。必須先把 JC-1 用 ddH2O 充分溶解混勻后，才可加入 JC-1 Buffer(1×)。不可先配制 JC-1 Buffer(1×)再加入
JC-1 Stain(200×)，否則導致 JC-1 很難充分溶解，嚴重影響后續的檢測。
2、 對于 6 孔板中的樣品，本試劑盒共可以檢測 100 個樣品；對于 12 孔中的樣品，本試劑盒共可以檢測 200 個樣品。
3、 裝載完 JC-1 后用 JC-1 Buffer(1×)洗滌時，盡量使 JC-1 Buffer(1×)保持 4℃左右，此時的洗滌效果較好。
4、 JC-1 探針裝載完并洗滌后盡量在 30min 內完成后續檢測，在檢測前需冰浴保存。
5、 勿把 JC-1 Buffer(5×)全部配制成 1×，因為操作過程中需直接使用 JC-1 Buffer(5×)。6、 如 JC-1 Buffer(5×)中有沉淀，必須全部溶解后才能使用，為促進溶解可以在 37℃加熱。7、 CCCP 為線粒體電子傳遞鏈抑制劑，有一定毒性，請注意小心防護。
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