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更新時間：2020-07-16 
瀏覽次數：1651玉米赤霉烯酮酶免檢測試劑盒適合檢測什么樣本？
上海信帆生物供應玉米赤霉烯酮酶免檢測試劑盒，產品質量穩定，現貨充足。
玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)ELISA 檢測試劑盒說明書
【概要】
玉米赤霉烯酮（Zearaleaone，ZEN）又稱F-2 毒素，是玉米赤霉菌的代謝產物，有雌激素樣作用，具有較強的生殖毒性致畸作用，可引起動物發生雌激素亢進癥，導致動物不孕或流產，對家禽、豬、牛和羊的影響較大，給畜牧業帶來很大經濟損失。
【適用范圍】
本試劑盒可定性、定量檢測谷物及其加工制品和飼料中的
玉米赤霉烯酮。
【試驗原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA 方法，在酶標板微孔條上預包被玉米赤霉烯酮抗原，樣本中玉米赤霉烯酮和此抗原競爭結合抗玉米赤霉烯酮抗體（抗試劑），同時抗玉米赤霉烯酮抗體與酶標二抗（酶標物）相結合，經TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含玉米赤霉烯酮的含量成負相關，對照標準曲線，再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中玉米赤霉烯酮的含量。
【試劑盒組成】
1. 96 孔板（8 孔*12 條）
2. ZEN 標準溶液×5 瓶：（1.5mL/瓶）
0 ng/mL, 1 ng/mL,3ng/mL,10ng/mL, 25 ng/mL
3. ZEN 酶標物1 瓶.............. ....................................6mL
4. ZEN 抗試劑1 瓶....................................................6mL
5. 底物液1 瓶.............................................................6mL
6. 顯色液1 瓶.............................................................6mL
7. 終止液1 瓶.............................................................6mL
8. 濃縮洗滌液（20×） 1 瓶...............................20mL
9. 樣品稀釋液Ⅰ 2 瓶.............................................40mL
10. 樣品稀釋液Ⅱ 2 瓶.............................................40mL
11. 反應板支架.............................................................1 塊
注：48 孔型號試劑盒內容物數量、體積略有差別
【需要而未提供的設備及試劑】
設備：
┅┅酶標儀450nm
┅┅振蕩器
┅┅粉碎機
┅┅離心機
┅┅天平：感量0.01g
┅┅微量移液器：單道20μL~200μL、100μL~1000μL
┅┅甲醇
┅┅去離子水
注：以上儀器均可代購
【試劑配制】
1. 洗滌工作液：將濃縮洗滌液用去離子水按1:19 體積比進行稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份去離子水）。
2. 60%甲醇-水：取無水甲醇，用去離子水按6:4 體積比例稀釋（6 份無水甲醇＋4 份水）。
【樣本前處理步驟】
一、小麥、大麥等谷物及其加工制品（稀釋倍數：20）
1. 稱取5.0g 粉碎后樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；
2. 充分振蕩30min 后過濾或4000rpm 離心5-10min；
3. 將濾液或上清液用去離子水以1:3 稀釋（例：1mL 濾液+3mL 去離子水），充分混勻后即為待測樣液；
4. 移取該樣液50uL 進行檢測。
二、玉米粉、麥類、麩皮、豆粕等谷物類以及玉米蛋白粉、雞料等飼料（稀釋倍數：60）
1. 稱取5.0g 粉碎后樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；
2. 充分振蕩30min 后過濾或4000rpm 離心5-10min；
3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅰ以1:11 稀釋（例：100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅰ），充分混勻后即為待測樣液；
4. 稀釋后的待測樣液需pH 值約7.0 左右，移取該液50uL進行檢測。
三、DDGS、玉米皮等飼料原料及豬料、鴨料、牛料等飼料混
合料（稀釋倍數：60）
1. 稱取5.0g 粉碎后樣品，加入25.0mL60%甲醇-水；
2. 充分振蕩30min 后過濾或4000rpm 離心5-10min；
3. 將濾液或上清液用樣品稀釋液Ⅱ以1:11 稀釋（例：100μL濾液+1100μL 樣品稀釋液Ⅱ），充分混勻后即為待測樣液；
4. 稀釋后的待測樣液需pH 值約7.0 左右，移取該液50uL 進行檢測。
注意：若樣品中ZEN 偏高，建議將樣品提取液再進一步稀釋后檢測。
【檢測步驟】
一、測定前須知：
1. 使用之前將所有試劑和所需板條回溫（20~25℃）。
2. 使用之后立即將所有試劑及剩余板條放置2~8℃。
3. ELISA 分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致
性，正確的洗板操作是ELISA 操作中的要點。
4. 在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，可用蓋板膜蓋
住微孔板。
二、操作步驟：
1. 將所需試劑及微孔板取出，放置室溫（20~25℃）30min
以上，液體試劑使用前均須搖勻。
2. 取出所需數量的微孔板，將不用的微孔板放回鋁箔袋中，
放置于2~8℃冷藏。不可冷凍。
3. 配置好的洗滌工作液在使用前也需回溫。
4. 將樣本和標準品對應微孔編號，建議每個樣本和標準品做2 孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5. 每孔加入250μL 左右洗滌液，洗滌液不得溢出，放置40s左右，甩掉洗滌液，在吸水紙上拍干。
6. 分別加入標準溶液/待測樣液50μL 到對應的微孔中，加入酶標物50μL/孔，后再加入抗試劑50μL/孔，輕輕震蕩混勻，遮蓋后室溫（25℃）避光反應20min。
7. 小心揭開蓋板，甩掉反應液，加入洗滌液250μL/孔充分洗滌5 次，每次間隔40s，用吸水紙拍干。
8. 每孔分別加入底物液和顯色液各50μL，輕輕震蕩混勻，遮蓋后室溫（25℃）避光顯色15min。
9. 加入終止液50μL/孔，輕輕震蕩混勻，設酶標儀于450nm處讀取每孔OD 值。
(若無酶標儀，則不加終止用目測法可進行判定)。
★注：該試劑盒佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導
致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。若環境溫度高于或低于
25℃，請適當縮短或增加反應及顯色時間。如有疑問，歡迎
垂詢。
【結果判定】
標準曲線的繪制與計算
用酶標儀測得每孔的光密度值(A)，繪制標準曲線。通過
準曲線，可準確定量樣品中ZEN 含量。
標準曲線：橫坐標為ZEN 標準濃度的對數，縱坐標為百
分比（即各標準品孔和樣品孔光密度值除以0 ng/mL 標準品
孔光密度值(A0)再乘以100%所得， 光密度值(標準孔或樣品
孔) ／光密度值(A0)×100%=%(縱坐標)）。相應每個樣品的
ZEN 濃度可從曲線上獲得。歡迎索取專門的數據處理軟
件進行計算。
備注：試劑盒初篩后，若出現陽性結果，建議用仲裁法進一步
確證。
【注意事項】
1. 試劑及樣本沒有恢復到室溫（20~25℃）會導致所有標準
的OD 值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準
曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應
立即進行下一步操作。
3. 每種試劑使用前均需搖勻。
4. 反應終止液為2M 硫酸，避免接觸皮膚。
5. 不要使用過了有效期的試劑盒；也不要摻雜使用過了有
效期的試劑盒；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6. 儲存條件：試劑盒保存于2~8℃，不能冷凍，將不用的
微孔板重新真空密封。標準物質和無色的顯色劑對光敏
感，因此要避光保存。
7. 試劑變質的跡象：顯色試劑有任何顏色表明顯色劑變質，
應當棄之。0 標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5
（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
8. 對玻璃器皿和ZEN 溶液消毒好用次氯酸鈉（10%，v/v）
溶液浸泡過夜。
9. 該試劑盒采用室溫反應（20~25℃），當反應溫度高于
25℃或者低于20℃時，均需相應縮短或延長反應時間，
【貯藏條件及保存期】
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產品有效期為6 個月。生物試劑日期見包裝盒。
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