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更新時間：2020-07-20 
瀏覽次數：1599上海信帆生物開展了：ATP含量測試盒操作培訓活動
本周上海信帆生物銷售部門針對“ATP含量測試盒”開展了一系列的操作培訓活動，包括檢測原理，檢測意義，試劑盒組成，樣本的前處理，如何計算數值，操作步驟，計算舉例等等，通過這次培訓，讓大家對該產品有了更加深刻的認識，也明白了該試劑盒操作的一些注意事項，方便在以后的工作中開展活動，也方便更加清楚明了的回復各位客戶的問題。本次活動得到公司領導和員工的*！
ATP含量測試盒說明(100管/48樣)
一、檢測意義
三磷酸腺苷(adenosine 5-triphosphate,ATP)是生物體內能量轉換基本的載體,其含量的變化直接關系到各器官的能量代謝。ATP作為重要的能量分子在細胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP水平的改變,會影響許多細胞的功能。通常細胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態下,ATP水平會下降,而高葡萄糖刺激等對于一些細胞可以上調細胞內ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細胞凋亡時ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時發生狀態。ATP含量測定試劑盒可以用于檢測紅細胞或組織內的ATP水平。
二、測定原理:肌酸激酶催化三磷酸腺苷和肌酸,生成磷酸肌酸,用磷鉬酸比色法進行檢測
三、試劑組成及配制:(100管/48樣)(本試劑盒附送雙蒸水一瓶,供客戶配試劑時使用)
| 組分 | 規格 | 保存 |
試劑一 | 底物液I | 粉劑×1瓶 | 室溫保存 |
底物液I配制:用時加10mL煮沸雙蒸水溶解,并沸水浴使溶解*;臨用前觀察如有結晶,可沸水浴溶解后置于37°C保存待測。 | |||
試劑二 | 底物液Ⅱ | 20mL×1瓶 | 4℃保存 |
試劑三 | 促進劑 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
稀釋液760uL×2瓶 | 4℃保存 | ||
試劑三應用液(促進劑)配制:臨用前取1支試劑三稀釋液加入1支試劑三粉劑中,充分溶解備用 | |||
試劑四 | 沉淀劑 | 液體5.5mL×1瓶 | 4℃保存 |
試劑五 | 顯色劑 | 甲液7mLx4瓶 | 4℃保存 |
乙液6mLx4瓶 | 4℃保存 | ||
顯色應用液的配制:用時取一瓶顯色劑甲液加入一瓶顯色劑乙液中,充分混勻4℃待用,現用現配 | |||
試劑六 | 終止液 | 50mL×1瓶 | 室溫保存 |
試劑七 | ATP標準品 | 粉劑×2支 | 4℃保存 |
5mmol/L ATP標準品貯備液配制:用時每支加雙蒸水lmL,制備5mmol/L ATP標準品貯備液。 | |||
1mmol/L ATP標準品應用液配制:將標準品貯備液與雙蒸水1:4稀釋,即5倍稀釋。 | |||
試劑八 | 雙蒸水 | 40mL×1瓶 | 4℃或室溫保存 |
注:本試劑盒中ATP 試劑三粉劑-20℃冷凍保存,其余試劑4℃保存,有效期3個月,開封后有效期為1個月。
四、樣本前處理:
1、紅細胞:抗凝全血取下層壓積紅細胞,一般按1:4的體積比加雙蒸水進行稀釋,再 混勻使溶血*,制備成溶血液。將制好的溶血液加入玻璃試管中沸水加熱煮10分鐘,取出混勻抽提1分鐘,4000轉/分鐘離心10分鐘,取上清液待測。
2、組織樣本:準確稱取組織稱重,按重量(g):體積(mL)=1：9的比例,加入9倍體積的沸雙蒸水,制成10%的勻漿液,再置于沸水浴中煮10分鐘,取出混勻抽提1分鐘,3500轉/分離心10分鐘,取上清液待測。
3、培養細胞:先離心處理將細胞與培養上清分離,除去培養上清,得到下層沉淀細胞(一般細胞數量達到106),將收集好的細胞加入300~500uL熱雙蒸水,置于熱水浴
(90-100°℃)中勻漿破碎,后將細胞懸液于沸水浴中加熱10分鐘,取出混勻抽提
1分鐘,即可用于測定(如果存在大塊細胞碎片,需離心后取上清測定)。
注:混勻抽提1分鐘即為漩渦混勻1分鐘。
五、操作步驟:
| 空白管 | 標準管 | 測定管 | 對照管 |
1mmol/L標準液 (μL) | 30 | 30 |
|
|
樣本(uL) |
|
| 30 | 30 |
試劑一:底物液I (μL) | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑二:底物液Ⅱ (μL) | 200 | 200 | 200 | 200 |
試劑三:促進劑 (μL) |
| 30 | 30 |
|
雙蒸水(μL) | 30 |
|
| 30 |
混勻，37℃水浴30分鐘 | ||||
試劑四:沉淀劑(μL) | 50 | 50 | 50 | 50 |
充分混勻后,4000rpm離心5分鐘,取上清液300μL進行測定 | ||||
上清液(μL) | 300 | 300 | 300 | 300 |
試劑五：顯色應用液(μL) | 500 | 500 | 500 | 500 |
混勻,室溫靜置2分鐘 | ||||
試劑六:終止劑(μL) | 500 | 500 | 500 | 500 |
混勻,室溫靜置5分鐘,波長636nm,光徑0.5cm,雙蒸水調零,測定各管吸光度值
注:在比色前，比色皿用自來水洗10余次,再用雙蒸水洗4~5次,以免磷污染
六、簡便操作表:(如果樣本量大,建議將試劑混合后再按照該表進行操作)
1、混合試劑配制:
工作液A: 按試劑一:試劑二:試劑三=100:200:30的比例配制,現用現配,用多少配多少
工作液B: 按試劑一:試劑二=100:200的比例配制,現用現配,用多少配多少
2、混合試劑配制*后按下表操作
| 空白管 | 標準管 | 測定管 | 對照管 |
1mmol/L標準液(μL) | 30 | 30 |
|
|
樣本(μL) |
|
| 30 | 30 |
工作液A(μL) |
| 330 | 330 |
|
工作液B(μL) | 300 |
|
| 300 |
雙蒸水(μL) | 30 |
|
| 30 |
混勻，37℃水浴30分鐘 | ||||
試劑四:沉淀劑(μL) | 50 | 50 | 50 | 50 |
充分混勻后,4000rpm離心5分鐘,取上清液300μL進行測定 | ||||
上清液(μL) | 300 | 300 | 300 | 300 |
試劑五：顯色應用液(μL) | 500 | 500 | 500 | 500 |
混勻,室溫靜置2分鐘 | ||||
試劑六:終止劑(μL) | 500 | 500 | 500 | 500 |
混勻,室溫靜置5分鐘,波長636nm,光徑0.5cm,雙蒸水調零,測定各管吸光度值。
注:在比色前，比色皿用自來水洗10余次,再用雙蒸水洗4~5次,以免磷污染。
七、注意事項:
1、此法具有微量、靈敏、快速的特點。對測定所用試管要求嚴格,要求不能有任何磷污染,建議使用全新一次性塑料試管,避免磷污染是檢測成敗的關鍵;
2、顯色應用液配好后,不可放置太久,一般可保存五天,好現用現配。隨時放冰箱
3、組織勻漿宜用2%~5%濃度的勻漿上清,若樣本濃度過高,則底色過深(對照管OD過高)需稀釋后再進行測定;一般通過做預試驗將對照OD值控制在1.0以下
上海信帆生物開展了：ATP含量測試盒操作培訓活動
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