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更新時間：2021-12-17 
瀏覽次數：1233液體樣本甘油含量酶法測定試劑盒如何正確使用！
描述：甘油是甘油三酯的水解產物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯；胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯；激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣，甘油含量是甘油三酯水解反應的可靠檢測指標，但檢測更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法和經典GPO-Trinder酶學反應相結合的方法，通過比色法測定液體樣本中的甘油含量。經過優化后，操作步驟更加簡單，檢測線性范圍在10-1200µmol/L，可靠性和重復性俱佳，適合生物醫學、食品實驗室檢測。
原理：在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化為3-磷酸甘油，再被甘油磷酸氧化酶氧化產生過氧化氫；在過氧化物酶作用下生色底物轉化為苯醌亞胺，其光密度值與甘油濃度成正比。
適用范圍：測定血液、細胞培養基、體液、酒類飲料中的甘油濃度。
組成 ：
R1試劑 40 ml
R2試劑 10 ml
4 mmol/L甘油標準品1 ml
4 oC，儲存3個月。
所需設備：酶標儀、生化分析儀或721、722型可見光分光光度計。最佳工作波長550nm，如無此波長建議優先選用570nm、次選530、490nm。
操作步驟：
一 樣本處理：
酒類、飲品、清澈液體樣本：可直接進行測定，如超過線性范圍可用蒸餾水或生理鹽水稀釋后再測定。
培養液：取不含酚紅、無顏色、無血清的細胞培養基，如有細胞碎片應4oC,，12,000g離心5min,取上清進行測定。
血液：新鮮抗凝血，4oC，2,000g離心5min得到血漿；非抗凝血，先4oC靜置2h得到血清后，2000g離心10min,除去血細胞。將得到的血漿/血清70oC 加熱10分鐘滅活內源脂肪酶，12,000g離心10min ,取上清測定或-20oC保存。
二 工作溶液配制：按4:1比例，取4 ml試劑R1與1 ml試劑R2混合，立即使用或4oC保存<1天，變色棄去。
三 標準品稀釋：用蒸餾水、生理鹽水或與樣品緩沖液一致的液體，將4 mM甘油標準品倍比稀釋為1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125 µmol/L，通常取其中4~6管即可，注意設置0濃度對照反應管。
四 甘油濃度測定：
參見下表進行加樣。為使反應時間盡量一致，減小實驗誤差，可先加入標準品、待測樣品，然后再加入工作溶液。（注意：當甘油濃度較低時，可將待測樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合，然后再進行測定，但是如果樣品體積超過100µl時將會稀釋工作液中酶的濃度，使反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍，可進行適當稀釋，然后根據稀釋倍數來計算樣品中甘油濃度。）
37oC或25oC反應 10分鐘。反應平衡后顏色在60分鐘內穩定。
先用蒸餾水+工作液的空白管調零，然后測定各管OD值。
繪制標準曲線并計算甘油濃度。
表一：
酶標微板測定的加樣比例（檢測范圍10-1200µmol/L）
（可對樣品和工作液比例進行微量調整）
低濃度甘油樣品測定 | 高濃度甘油樣品測定 | |||||
空白管 | 標準品 | 樣本管 | 空白管 | 標準品 | 樣本管 | |
蒸餾水µl | 50 | 5 | ||||
標準品µl | 50 | 5 | ||||
樣品µl | 50 | 5 | ||||
工作液µl | 150 | 150 | 150 | 195 | 195 | 195 |
表二：
1 ml比色杯測定的加樣比例（檢測范圍10-1200µmol/L）
低濃度甘油樣品測定 | 高濃度甘油樣品測定 | |||||
空白管 | 標準品 | 樣本管 | 空白管 | 標準品 | 樣本管 | |
蒸餾水µl | 200 | 50 | ||||
標準品µl | 200 | 50 | ||||
樣品µl | 200 | 50 | ||||
工作液µl | 600 | 600 | 600 | 750 | 750 | 750 |
本產品僅供科研實驗用，不做其它用途！
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