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更新時(shí)間：2022-12-20 
瀏覽次數(shù)：1017鏈球菌G蛋白瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用注意事項(xiàng)
鏈球菌G蛋白（Streptococcus Protein G 簡(jiǎn)稱SPG）是G、C型鏈球菌細(xì)胞壁中的一種蛋白質(zhì)，能特異性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段結(jié)合而不影響其Fab段與抗原分子結(jié)合的能力，其親和填料可以用于從血清、腹水、組織培養(yǎng)物等上清中結(jié)合吸附并純化免疫球蛋白（抗體）。
技術(shù)指標(biāo)：
基質(zhì) | 4%高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠 |
配基 | 重組蛋白G |
配基密度 | ≥6 mg/ml |
填料粒徑 | 60 ~ 180 μm |
最大流速 | 800 cm/h |
推薦流速 | 20 ~ 100 cm/h |
工作（清洗）pH值 | 2 ~ 9(2 ~ 10) |
耐反壓 | 0.3 MPa |
載量 | ≥40 mg/ml IgG |
抗體與蛋白A、蛋白G的結(jié)合力：
種類 Species | 亞型 Antibody Class | 蛋白A Protein A | 蛋白G Protein G |
人 Human | IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab | +++ +++ + +++ + - + + | +++ +++ +++ +++ - - - + |
小鼠 Mouse | IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM | + +++ +++ +++ - | ++ +++ +++ +++ - |
大鼠 Rat | IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c | + - - +++ | ++ +++ + +++ |
牛 Cow | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ |
山羊 Goat | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ |
馬 Horse | IgG(ab) IgG(c) IgG(T) | + + - | - - +++ |
兔Rabbit | IgG | +++ | +++ |
豬Pig | IgG | +++ | + |
狗Dog | IgG | +++ | + |
雞Chicken | IgY | - | - |
注：-表示不結(jié)合；+表示微弱結(jié)合；++表示中等結(jié)合；+++表示很強(qiáng)結(jié)合。
應(yīng)用舉例：
結(jié)合緩沖液：20 mM磷酸鹽緩沖液（PB），pH 7.4
洗脫緩沖液：0.1 M甘氨酸-鹽酸緩沖液，pH 2.7
中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 9.0
1)1 ml重組蛋白G瓊脂糖凝膠預(yù)填柱，用5 ~ 10個(gè)柱床體積的蒸餾水洗去保存液；
2)用結(jié)合緩沖液平衡 5 ~ 10個(gè)柱床體積；
3)將5 ml兔多抗血清用結(jié)合緩沖液稀釋至50 ml，0.45 μm濾膜過(guò)濾上樣；
4)用結(jié)合緩沖液平衡 5 ~ 10個(gè)柱床體積至基線；
5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調(diào)節(jié)其pH至中性；
6)每次使用后再用3 ~ 5個(gè)柱床體積的洗脫緩沖液再生清洗；
7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來(lái)的兔多抗純度在95%以上。
圖 1
注意事項(xiàng)：
1)預(yù)填柱使用簡(jiǎn)易方便，在沒有儀器設(shè)備的條件下也可以完成純化任務(wù)。
2)樣品洗脫后一般pH很低，應(yīng)立即用堿性中和緩沖液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩沖液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。
3)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果，如果已經(jīng)產(chǎn)生氣泡，可以自行重裝柱子。
4)通常目標(biāo)樣品洗脫后應(yīng)繼續(xù)用0.1 M甘氨酸-鹽酸緩沖液（pH 2.0 ~ 2.7）洗3 ~ 5個(gè)柱體積，然后用平衡緩沖液清洗5個(gè)柱體積以上，作簡(jiǎn)易再生。
5)使用數(shù)次后應(yīng)進(jìn)行在位清洗，建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3個(gè)柱體積（10 ~ 30 min），立即用平衡緩沖液清洗5個(gè)柱體積以上；或70%乙醇洗5個(gè)柱體積以上（可保持4 ~ 6 h），再用平衡緩沖液清洗5柱體積以上。在位清洗能去除強(qiáng)疏水性蛋白質(zhì)和脂類，恢復(fù)柱子的載量和流速。
鏈球菌G蛋白瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用注意事項(xiàng)
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