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更新時間：2023-08-31 
瀏覽次數：2148HE染色實驗的檢測方法
HE染色法，即是蘇木精-伊紅染色法。石蠟切片技術里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性，主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。易于被堿性或酸性染料著色的性質分別稱為嗜堿性和嗜酸性；若于兩種染料的親和力都不強，則呈中性。一般的組織變化和組織產物都可以通過這一染色法顯示出來。是形態學常用的染色方法。
染色結果：細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色，軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色，粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色，胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色，彈力纖維呈亮粉紅色，紅血球呈橘紅色，蛋白性液體呈粉紅色。
1 材料
1.1 主要試劑
石蠟、無水乙醇、氨水、硫酸鋁鉀、碘酸鈉、冰醋酸、甘油、蘇木素、伊紅
1.2 溶液配制
PBS溶液：600ml的ddH2O中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g
KH2PO4，用HCl調節溶液pH至7.4，定容至1L，濾器過濾后，高壓滅菌，室溫保存。
1.3 主要儀器及耗材
正置顯微鏡、恒溫烘箱、石蠟切片機 、攤片機、移液器、水浴鍋
數字切片掃描儀：濱松 NanoZoomer( S210）公司產品
2 方法
2.1樣本包埋與固定
（1）固定：根據需要取材后置于福爾馬林中固定48小時后；
（2）洗滌與脫水：將固定后的組織用流水沖洗，去除殘留的固定液和雜質。不同濃度的乙醇逐級脫水，50%、70%、85%、95%直至純酒精（無水乙醇），每級2小時。70%乙醇中可長期保存；
（3）透明：50%酒精+50%二甲苯中2小時，純二甲苯兩小時，再一次純二甲苯兩小時；
（4）浸蠟：先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬1～2小時，再先后移入2個熔化的石蠟液中浸漬各3小時左右；
（5）包埋：將浸好蠟的組織塊放入裝有蠟液的容器中，擺好組織塊位置。待石蠟凝固后將周圍多余的石蠟去除，準備切片；
（6）切片：將切片刀裝在刀片機的刀架上并固定緊，固定蠟塊底座或蠟塊，調整蠟塊與刀至合適位置，刀刃與蠟塊表面呈5度角。調整切片機上的切片厚度為4-7μm，然后切片。
2.2 HE染色
（1） 脫蠟：60℃、30min；二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ；
（2）水化：將脫蠟后的切片經100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、雙蒸水各3min ；
（3）將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數分鐘，流水沖洗；
（4）1%鹽酸酒精分化0.5-1min；
（5）流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻；
（6）碳酸飽和水溶液反藍1min后流水沖洗；
（7）入70％和90％酒精中脫水各10min；
（8）入酒精伊紅染色液染色2-3min；。
（9）脫水透明：染色后的切片經純酒精脫水，再經二甲苯使切片透明；
（10）封片：將已透明的切片滴上中性樹膠，蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后，貼上標箋，切片標本就可使用；
2.3 圖像采集
通過掃描，采集圖片。
送樣運輸要求：
樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運輸送樣。
切勿固定時間過長，切勿冷凍結冰。
HE染色實驗的檢測方法
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