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更新時間：2024-08-07 
瀏覽次數：1228人癌胚抗原（CEA）含量檢測原理
背景介紹：
癌胚抗原（CEA）描述了一組參與細胞粘附的高度相關的糖蛋白。它通常在胎兒發育過程中的胃腸組織中產生，但在出生前停止產生，所以CEA在健康成年人血液中的含量通常很低（約2-4納克/毫升）。然而，在某些類型的癌癥中血清水平會升高，這意味著它可以在臨床試驗中作為腫瘤標志物使用。重度吸煙者的血清水平也會升高。CEA是糖基磷脂酰肌醇（GPI）細胞表面錨定的糖蛋白，其專門的硅藻糖基化糖型可作為功能性結腸癌L-選擇素和E-選擇素配體，可能對結腸癌細胞的轉移擴散至關重要。從免疫學角度看，它們的特征是CD66分化簇的成員。這些蛋白包括CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e、CD66f。
檢測原理：
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人癌胚抗原（CEA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人癌胚抗原（CEA）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
標準品 | 0.3mL×6管 | 0.3mL×6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
注：
1. 標準品濃度依次為：40、20、10、5、2.5、1.25 ng/mL
2. 經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3. 待測樣本孔先加待測樣本50μL，空白孔不加。樣本不足的情況下，上樣量最少10μL。操作方法：待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
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