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更新時間：2016-06-22 
瀏覽次數：1999小鼠β干擾素(IFN-β)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
*部分 ELISA簡介
ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。自上世紀70年代初問世 以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用 于生物學和醫學科學的許多領域。
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。
第二部分 ELISA 的樣本實驗準備
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定。對收集后當天就進行檢測的樣本，及時儲存在4℃備用。對于隔天再檢測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃備用，有條件的，-70℃凍存備用。標本應避免反復凍融。
液體類標本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
第三部分 ELISA試劑盒的檢測目的和實驗原理
1.檢測目的
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中β干擾素(IFN-β)含量。
2.實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠β干擾素(IFN-β)水平。用純化 的小鼠β干擾素(IFN-β)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中 依次加入β干擾素(IFN-β)，再與 HRP 標記的β干擾素(IFN-β)抗 體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β干擾素(IFN-β)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標 準曲線計算樣品中小鼠β干擾素(IFN-β)濃度。
第四部分 試劑盒組成
試劑盒組成 | 48T | 96T | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 |
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封板膜 | 2片（48） | 2片（96） |
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密封袋 | 1個 | 1個 |
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酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品（120pg/ml） | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑A液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色劑B液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
終止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
濃縮洗滌液 | (20倍)20ml×1瓶 | (30倍)20ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
第五部分 操作步驟
60pg/ml | 5 號標準品 | 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
30pg/ml | 4 號標準品 | 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
15pg/ml | 3 號標準品 | 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
7.5pg/ml | 2 號標準品 | 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
3.75pg/ml | 1 號標準品 | 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 |
重復 5 次，拍干。
15 分鐘.
第六部分 計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數， 即為樣品的實際濃度。
（此圖僅供參考）
第七部分 注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未 用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計 算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
第八部分 檢測范圍
2pg/ml-60pg/ml
第九部分 保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6 個月
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