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上海信帆生物科技有限公司是一家的ELISA試劑盒供應(yīng)商，提供ELISA試劑盒，生化法試劑盒,放免代測服務(wù)等.全程提供技術(shù)指導(dǎo)，提供售后服務(wù)，有質(zhì)量問題免費包退換，免除您實驗的后顧之憂。如有需要歡迎，也可以索要試劑盒說明書。
產(chǎn)品型號：廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時間：2024-10-17訪 問 量：1181
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所有產(chǎn)品僅供科研使用，不能用于食用和醫(yī)療等
人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D) ELISA試劑盒 |
本試劑盒用于測定血清，血漿及相關(guān)液體樣本中小鼠雌激素(E)的含量。 |
ELISA技術(shù)原理：以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底 |
物的高效催化作用相結(jié)合起來 |
1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。 |
2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。 |
3. 酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。 |
4. 受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標記 的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。 |
5. 此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。 |
6. 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量 與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定 性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水 平），并且重復(fù)性好。
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樣本處理及要求： |
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。 |
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。 |
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 |
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。 |
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?/span>2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 |
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. |
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 |
人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D) ELISA試劑盒 |
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操作步驟 |
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為30ng/L，20ng/L ，10ng/L，5ng/L， 2.5ng/L）。 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 |
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 |
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。 |
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 |
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 |
7. 溫育：操作同3。 |
8. 洗滌：操作同5。 |
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. |
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。 |
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 |
注意事項： |
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 |
2． 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。 |
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 |
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 |
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 |
6． 底物請避光保存。 |
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. |
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 |
9． 本試劑不同批號組分不得混用。 |
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 |
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