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Western blot實驗代測，WB實驗操作注意事項

免疫印跡（immunblotting）又稱蛋白質印跡（western blot）,他是根據(jù)抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。western blot是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡（western blot）具有

SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)在已成為蛋白分選的一種常規(guī)技術。免疫印跡（western blot）常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分選。

客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測目的蛋白的一抗（常規(guī)指標本公司提供一抗）。樣品要求為：

1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。

2、細胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。

3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。
 

Western blot結果及數(shù)據(jù)提供

內參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實驗報告，包括整個試驗流程所涉及的實驗數(shù)據(jù)和實驗步驟。如需進行蛋白純化服務，將提供檢測報告

Western blot實驗服務

服務內容

我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務，如需要還可進行灰度分析。

說明

1、建議提供目的蛋白陽性表達樣品（純蛋白或有陽性表達的細胞或組織）作為陽性對照。

2、每張膜檢測1-8個樣品。

3、如果一抗由客戶提供，請在正確條件下保存，避免污染及反復凍融。

western blot (WB)服務須知： 
1. 樣本要求盡可能新鮮；
2. 樣本量：組織樣本，質量大于100mg；細胞樣本，細胞數(shù)大于1×106；
3. 您可自備一抗，也可讓我公司代買。為保證質量，抗體醉好為進口單克隆抗體；
4. 服務時限和內容：收到樣本之日起2-3周內提交實驗結果，具體包括實驗方法、步驟、所用試劑、儀器、圖片及相關分析數(shù)據(jù)等；
5. 報告提供：實驗結果將以電子或書面形式提交給您。

Western blot的原理 
   Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。

   以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

Western blot實驗代測，WB實驗操作注意事項

為什么同一批次提取蛋白跑出的條帶不*？

這個問題很多老師在做western blotting的時候遇見過，內參*，而目的條帶每次都不一樣，原因可能是在顯影液環(huán)節(jié)，簡單來說就是你的膜沒有淋干凈，上面殘留參差不齊的T/TBS，T/TBS能稀釋顯影液，目的條帶本來表達量就少，某一個點殘留的T/TBS稍微多一點就可能導致顯影效果下降，所以建議在顯影液反應前，盡量將膜上的洗膜液淋掉（當然也不能讓膜干了，要是實驗室富裕的話，也可以多添點顯影液，效果一樣）。

Western blot實驗代測，WB實驗操作注意事項